Description
-Sistema Confocal:
Sistema de excitación
Módulos de láseres:
Líneas de excitación: laser 404nm, laser 440nm, laser blanco (488nm, 514nm, 543nm, 568nm, 615nm, 640nm, 685nm, 710nm, 750nm y 790nm).
Las siguientes líneas de láseres pulsantes: 404nm, 440nm, 488nm, 514nm, 543nm, 568nm, 615nm, 640nm, 685nm, 710nm, 750nm y 790nm.
-Sistema de detección
· Sistema de detección espectral sin filtros en la ruta de detección.
· Rango de detección desde aproximadamente 410 nm hasta 850nm
· Cinco detectores espectrales para fluorescencia y reflexión, de alta sensibilidad y relación señal/ruido con capacidad de adquirir en modo de contaje de fotones:
o Cuatro de dichos detectores muy alta sensibilidad con las siguientes especificaciones:
§ Eficiencia cuántica superior al 58%
§ Trabajo en modo de contaje de fotones y analógico
§ Tiempos muertos de detección <1,3ns
§ Óptimos para aplicaciones confocal y basadas en tiempo de vida y aplicaciones confocales
§ Compatibles en aplicaciones en reflexión
§ Un detector de luz transmitida.
Sistema Super resolución basado en deconvolución con las siguientes características:
· Resolución lateral inferior a aproximadamente 120 nm.
· Resolución axial mejor que el doble que en el confocal.
· Súper-resolución con detectores espectrales incluidos en la configuración del confocal.
· Detección simultánea en súper-resolución de como mínimo 4 canales.
· Permite adquirir series en súper-resolución xyz y xyzt.
· Compatible con diferentes tipos de adquisiciones:
o Plano único
o Serie en Z
o Serie temporal
o Serie espectral
o Múltiples colores simultáneamente.
· Procesado en tiempo real.
· Muestra de los datos brutos al final de la adquisición y los procesados para comprobar el resultado.
· Compatible con todos los objetivos del sistema.
· Completamente integrado en el software y hardware del Confocal.
Sistema adquisición de imágenes mediante promedio de tiempo de vida en cada pixel.
-Sistema integrado en la adquisición del Confocal:
· Procesado de las imágenes espectrales en tiempo real mediante la medición del AAT (average arrival time) de los fotones emitidos, permitiendo comparar las imágenes espectrales con las obtenidas por ATT.
· Incorporación de aplicaciones que permitan como mínimo el separar fluorocromos superpuestos o solapados, separar o eliminar auto fluorescencia, eliminar reflexión por tiempo de vida y visualizar FRET (Förster Resonance Energy Transfer) en muestras basado en cambios de tiempo de vida del “Donor”.
· Adquisición simultanea de la imagen espectral basada en intensidad y la imagen basada en tiempo de vida:
o Supresión y/o separación de la autofluorescencia de la muestra con respecto a la fluorescencia de los marcadores utilizados, mediante la medida del tiempo de vida de los fluorocromos.
o Separación de canales solapados espectralmente mediante la información del tiempo de vida medio de la fluorescencia en cada uno de los pixeles adquiridos.
o Supresión de reflexión mediante la medida del tiempo de vida de emisión de la muestra.
o Generación de ventanas de tiempo de vida medio de fluorescencia para limitar rangos de detección.
o Cuantificación las interacciones moleculares en tiempo real utilizando información basada en la vida útil por ejemplo para FRET y otras aplicaciones de dinámica molecular de fluorescencia.
Sistema de FLIM.
· El equipo debe permitir la adquisición de imágenes de tiempos de vida de fluorescencia (FLIM).
· El software de adquisición de este modo de trabajo está integrado en el software de adquisición principal.
· Compatible con las líneas pulsantes anteriormente requeridas en el sistema de excitación.
· La frecuencia de pulsos de los láseres permite la medición del tiempo de llegada de fotones, al menos, en el rango de 0 a 12.5 ns.
· Dispone de herramienta de visualización de nube de puntos de tiempos de vida (PHASOR FLIM).
· Visualización gráfica en 2D de los tiempos de vida. Permite la selección en el propio gráfico de los tiempos de vida de interés mediante definición de regiones, las cuales deben poder visualizar los píxeles correspondientes en la imagen adquirida.
· Herramienta que permite la separación de distintos componentes de tiempos de vida.
· Herramienta de eliminación de auto fluorescencia mediante FLIM.
· Combinable con el escáner de alta velocidad.
· Posibilidad de adquirir simultáneamente las imágenes espectrales y las de FLIM para su comparación.
Licencia de software (AIVIA) para análisis de imágenes basados en IA con capacidad de entrenar el clasificador de pixeles para aprendizaje automático en la mejora y análisis de las imágenes. Debe incorporar:
o Capacidad para entrenar y aplicar el Clasificador de Píxeles impulsado por aprendizaje automático de IA para la mejora y segmentación de imágenes, simplificando radicalmente la segmentación de imágenes. El usuario debe poder entrenar a la IA para buscar objetos de interés.
o Integración de Aprendizaje Profundo y Python para aplicar cualquiera de los modelos de aprendizaje profundo preentrenados de IA para la mejora y/o segmentación de imágenes.
o Amplia gama de recetas de análisis de imágenes que incluyen conteo y seguimiento de núcleos, conteo y seguimiento de células, conteo y seguimiento de partículas, ensayo de proliferación celular, densidad celular en un tejido, crecimiento de neuritas, cicatrización de heridas (contraste de fase), detección de colonias de células madre (contraste de fase), seguimiento de células (contraste de fase), detección de objetos (mallas), detección de objetos (puntos), seguimiento de objetos y trazado de linajes.
o Determinación automática de los parámetros requeridos utilizando aprendizaje profundo preentrenado para análisis de objetos 3D.
o Análisis de distancia 3D para objetos detectados de cualquier tipo y forma.
o Procesamiento por lotes de recetas, modelos de aprendizaje profundo entrenados y clasificadores de píxeles entrenados.
o Herramientas de análisis y edición semiautomáticas de contornos, que permita reconstruir formas 3D complejas como orgánulos, neuronas y otras células.
o Clasificar objetos, por aprendizaje automático para clasificar e identificar nuevos fenotipos. Análisis de colocalización de píxeles y objetos (incluyendo el cálculo del coeficiente de correlación de Manders y Pearson).
o Renderización de imágenes multicanal de 2 a 4D de hasta 3 TB (tamaño bruto) con millones de objetos/células/neuronas/rastreos detectados.
Sistema de incubación
· Cabina de termostatización que englobe todo el microscopio, para el mantenimiento de las muestras vivas en condiciones óptimas.
· Control digital de la temperatura en el interior de la cámara.
o Entre, aproximadamente, 3ºC sobre la temperatura ambiente y hasta 40ºC
o Precisión ±1ºC
· Control digital de la mezcla y flujo de CO2 en la muestra
o Rango 0-18%
o Flujo de salida 0,1-0,8 l/min
o Precisión ±0,1%
· Control de humedad
· Insertos para portas, placas Petri 35” y placas multi-pocillo
Descripción técnica casa comercial:
https://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/stellaris/
Lenses / Objectives
5x NA 0,15 seco
10x NA 0,40 seco
20x NA 0,75 seco
25x NA 0,95 agua con larga distancia de trabajo, ≥2,5mm
o 40x NA 1,25 glicerol
63x NA 1,40 aceite
63x NA 1,20 glicerol